一、产品介绍：

金属螯合亲和层析色谱，又称固定金属离子亲和层析色谱，其原理是利用蛋白质表面的特定氨基序列，如6 X His能与多种过渡金属离子Cu2+，Zn2+，Ni2+，Co2+，Fe3+发生特殊的相互作用，利用这个原理可以把带有这类特定氨基酸序列的蛋白质吸附，再使用不同浓度的竞争物洗脱，从而达到分离的目的。基于这个原理，偶联有这类金属离子的琼脂糖凝胶就能够对这些含有特定氨基序列的蛋白质或者与金属离子具有吸附作用的多肽、核苷酸等进行有效的分离。半胱氨酸和色氨酸也能与固定金属离子结合，但这种结合力要远小于组氨酸残基与金属离子的结合力。

二、产品技术指标：

说明：本产品可用于可溶性表达带6XHis标签蛋白的纯化，也可用于溶解的带6xHis标签的包涵体蛋白的纯化。降低溶液的pH值或者提高溶液中咪唑的浓度可使结合于Ni离子的目标蛋白从琼脂糖介质上洗脱。IDA分子是一种三价金属离子螯合剂，与Ni离子形成三根配位键，固定化的Ni离子通过剩余的三个键合轨道与目标蛋白的组氨酸标签发生特异性结合。相比较NTA介质，IDA对蛋白支的结合能力较强，因此，需要洗脱的咪唑浓度要高。IDA-Sepharose是最经典最稳定的金属螯合亲和层析介质，配基脱落少，价格实惠，被广泛用于工业级别生产。

三、操作建议：

Buffer A(结合缓冲溶液)：20mM Tris-cl，300mM Nacl，10mM 咪唑，PH8.0;

Buffer B(洗脱缓冲溶液)：20mM Tris-cl，300mM Nacl，500mM咪唑，PH8.0;

上样流速：100cm/h（AKTA、蠕动泵）；

洗脱条件：10%B，20%B，50%B，100%B。

洗脱流速：150cm/h---300cm/h（AKTA、蠕动泵）。

注：目的蛋白主要在50%B，10%B洗杂。

四、操作步骤：

  1、 取10mlNi-MicroroseC凝胶倒入抽滤器中，用5—10个体积的去离子水抽洗干净，去除残留的乙醇。

  2、 将清洗干净的凝胶装入1.6 X 20CM层析，柱高3—5cm。

  3、 螯合NI离子，用浓度为0.1M的硫酸镍以3ml/min的流速冲洗层析柱。

  4、 平衡，用Buffer A（结合缓冲液）平衡层析柱 2-5 个床体积，流速为5ml/min

  5、 上样，将细胞破碎上清用0.45μm 滤膜过滤后上样， 流速3ml/min

  6、 漂洗，用buffer A冲洗层析柱3-5个床体积，流速为 3ml/min

  7、 洗脱，用分别含有10%B、20%B、50%B、100%B（50mM，100mM,250mM,500mM咪唑）buffer B 进行阶段洗脱，流速为 5ml/min，收集各阶段洗脱峰。

  6、 去离子水冲洗层析柱 5--10 个柱床体积，再用 20%的乙醇流洗 3 个柱床体积，流速为5ml/min，层析柱充满20%乙醇后可以置于+4~8℃环境中保存。