台盼蓝 Trypan Blue

　　中英文名称：台盼蓝(Trypan Blue)或称台盼兰、锥虫蓝、曲利苯蓝

　　分子式：C34H24N6O14S4Na4

　　分子量: 960.82

　　可溶于水(10mg/ml)

　　是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性。还常用于检测细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。

　　台盼蓝可被巨噬细胞吞噬，故可用于巨噬细胞的活体染色剂。

　　正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡，这与中性红作用相反。因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。

　　台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。

　　台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。

　　步骤：

　　1、4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4度保存。使用时。用PBS稀释至0.4%。(也可买Gibco的成品);

　　2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。

　　3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。(终浓度0.04%)

　　4、计数：在三分钟内，分别计数活细胞和死细胞。 1 e7 e* I* S) ^% X8 U$ K- _

　　5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而活细胞拒染呈无色透明状。

　　6、统计细胞活力：活细胞率(%)= 活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)×100%

台盼兰 Trypan Blue